.png){kind=logo}
Datum meetrapport
10-2-2016
Reductie van Ethylacetoacetaat en Immobilisatie Project Biokatalyse
Datum uitvoering: 01-02-16 / 08-02-16
Uitvoerenden: H. Kruizinga / R. Reich
Groep: DC6
Docent: A. Jonker 1 / 3
Inhoudsopgave Reductie van Ethylacetoacetaat en Immobilisatie......................................................................2 Summery:...................................................................................................................................2 Samenvatting:..............................................................................................................................2 Inleiding:....................................................................................................................................2 Werkwijze:.................................................................................................................................2 Resultaten..................................................................................................................................3 Conclusie:..................................................................................................................................4 Literatuur:..................................................................................................................................4 Bijlagen:....................................................................................................................................4
1 2 / 3
Reductie van Ethylacetoacetaat en Immobilisatie
Summery:
The goal of this experiment was to synthesize (S)-( + )-ethyl 3-hydroxybutanoate from ethyl acetoacetate and baker’s yeast. Sucrose was added to the baker’s yeast to catalyse the reaction. The product was seperated by liquid-liquid extraction (LLE) with water and Methyl tert-butyl ether (MTBE). The product was analyzed with IR and DLC. The IR analyses lead to the conclusion that there was Ethyl-3- hydroxybutanoaat formed, but it couldn’t be concluded if its S(+) or R(-). The Rf value is 0.52. The immobilization failed because a wrong enzyme has been used.
Samenvatting:
Het doel van dit experiment was het synthetiseren van (S)-(+)-ethyl 3-hydroxybutanoate vanuit ethyl acetoacetaat en gist. Sucrose werd toegevoegd aan het gist om een catalyse reactie op gang te brengen. Het product werd gescheiden door middel van vloeistof vloeisof extractie (LLE) met water en methyl tert-butyl ether. Het product werd geanalyseerd met IR en DLC. Door IR-analyse kan worden geconcludeerd dat er ethyl-3-hydroxybutanoaat gevormd is, maar er kan niet geconcludeerd worden of het S(+) of R(-) is. De Rf waarde is 0.52. De immobilisatie is mislukt doordat er een verkeerd enzym gebruikt is.
Inleiding:
De reactie is gebaseerd op een enzymatisch gekatalyseerde reductie. NADPH (gereduceerd nicotinamide adenine dinucleotide fosfaat) levert H + -ionen aan het ethyl acetoacetaat voor de vorming van een hydroxylgroep.Figuur 1: Reductie van Ethylacetoacetaat: (S)-(+)-Ethyl 3-Hydroxybutanoaat. (Lit. 1)
Werkwijze:
Het voorschrift Cursusboek Project Biokatalyse (Lit. 1) beschrijft de werkwijze van de Reductie van Ethylacetoacetaat.Het voorschrift EIBE European Initiative fir Biotechnology Education (Lit. 2) beschrijft de werkwijze voor de Immobilisatie.
Week1:
Reductie van Ethylacetoactaat:
In een erlenmeyer van 1 L, voorzien van een bellenteller, met 160 mL water werd tijdens het roeren met een grote roervlo 30.10 gr sucrose en 20.563 gr gist toegevoegd. Het mengsel werd gedurende 40 minuten bij ongeveer 30 °C geroerd. Het mengsel zag er bruin uit. Na een kwartier roeren begon het mengsel te schuimen. Let op: 1 a 2 luchtbellen CO2 per seconde! Na de 40 minuten werd er 2 mL (0.0157 mol) ethylacetoacetaat toegevoegd. De fermentatie suspensie werd gedurende 120 min geroerd. Er werd nogmaals
- mL (0.0157 mol) vers gedistilleerde ethylacetoacetaat toegevoegd. De fermentatie suspensie werd voor
een periode van 7 dagen opgeslagen in een erlenmeyer van 500 mL voorzien van een stop gemaakt uit watten.
Immobilisatie:
- / 3
.png)